Akın52

1.ALET VE EKİPMANLAR
•Analitik Terazi (0.01 g hassasiyette)
•Otoklav
•Sterilizatör (160 +/- 5 0C)
•İnkübatörler (36 0C +/-1, 41,5 0C +/-1)
•Su Banyosu (80-100 0C)
•Stomacher
•PH Metre
•Bunzen Beki
•Steril bıcak, pens, spatül vb.malzemeler
•Tüp karıştırıcı
•Steril petriler (15 x 90 mm)
•Otomotik pipet ve steril pipet ucu
•Cam tüpler ve tüp sporlar
•Erlen, beher, mezür ve benzeri standart laboratuvar cam maddesi
•Mikrodalga fırın
•Mikroskop

2.KULLANILAN BESİYERLERİ VE HAZIRLANIŞLAR
2.1.Maximum Recovery Diluent :
Formül :
Pepton :1,0 g
Sodium clorür :8,5 g
Distile su :1 litre

Tartılan hazır besiyeri içeriği distile su ile ısıtılarak çözündürülür. Otoklav sonrası pH 7+0,2 olacak şekilde ayarlanır. 121+1oC‘de 15 dakika sterilize edilir.

2.2.Violet Red Bile Glukoz Agar (VRBGA):
Formül:
Yeast extract :3 g
Peptone yada gelysate :7 g
Bile salts yada bile salts no.3 :1,5 g
Glukose :10 g
NaCl :5 g
Neutral red :0,03 g
Crystal violet :0,002 g
Agar :15 g
Distile su :1000ml
Hazır Besiyeri içeriği aseptik koşullarda steril erlenmayere tartılır. pH 6,8+0,2 olacak şekilde ayarlanır. Su banyosunda veya mikrodalga fırında ısıtılarak çözündürülür. 45+1oC‘de ekimi yapılmış petrilere dökülür.

2.3.Tuzlu Glukoz Agar :
Formül:
Tryptone : 2g
Maya extraktı : 1g
Glukoz : 10g
NaCl : 5g
Potasyum-mono-hidrojenfosfat : 0,3g
Agar : 2,5g
Bromtimolblue (%0,2lik ) :40ml
(%0,2 lik Bromthymol blue: Bromthymoleblue 0,1g, 0,1N NaOH ve 47,5ml distilesu)
Distile su : 1000ml

Hazırlanan karışım ısıtılarak çözündürülür. Otoklav sonrası pH 7+0,2 olacak şekilde ayarlanır. 121+1oC‘de 15 dakika sterilize edilir. Petrilere aseptik koşullarda dökülür. Buzdolabında saklanır.

2,4.Nutrient Agar
Formül :
Beef extract : 3 g
Peptone : 5 g
Agar : 15 g
Distile su : 1 litre

Tartılan hazır besiyeri içeriği distile su ile ısıtılarak çözündürülür. 121+1oC‘de 15 dakika sterilize edilir. Otoklav sonrası pH 6.8+0,2 olacak şekilde ayarlanır. 50 oC‘de aseptik koşullarda petrilere aktarılır.

2.5 Oksidaz test kiti
Hazır kit kullanılmaktadır.

3.METOT
10 g(ml) örnek 90 ml (yada x numune miktarı x9 dilisyon sıvısı) Maximum Recovery Diluent ile gıda mikrobiyolojisi laboratuvar kurallarına uygun olarak homojenize edilir. 1/10’luk dilüsyondan 2 steril petri kutusuna 1’er ml konur. Eğer numunedeki entereobacteriacea sayısı yüksek bekleniyorsa seri dilisyonlar da yapılabilir Aseptik koşullarda hazırlanan VRBGA besiyeri ortalama 45oC’ye soğutularak dökülür ve karıştırılır. 35oC de 20-24 saat inkübasyona bırakılır. Sonuç olarak petrilerde oluşan kolonilerden menekşemsi zon oluşturan kolonilerin sayısı belirlenip kaydedilir. Tipik kolonilerden en az iki tanesine doğrulama testleri uygulanır.
Not: Petrilerdeki koloni sayısı 25-250 arası olursa sayılabilir.

3.1Doğrulama Testleri
VRBGA da üreyen tipik kolonilerden Nutrient agar yüzeyinde zenginleştirilir ve Tuzlu glukoz agara geçilir. Tuzlu glukoz agarın yüzeyi mineral yağ ile örtülür. 35-37oC de 20-24 saat inkübasyona bırakılır.

Oksidaz testi :
5-10 saniye içinde koloninin koyu mor renge dönüşmesi pozitif reaksiyon kabul edilir.Oksidaz testi negatif ve Tuzlu glukoz agar sarı renge dönüşmüş ise koloniler Enterobakteriacea olarak kabul edilir.

NOT: VRBG Agar besiyeri suda kaynatılarak çözülür. Besiyeri 2 dakikadan fazla kaynatılmamalıdır. Gerekirse, kaynamadan sonra pH , oda sıcaklığında 7,4 olacak şekilde ayarlanır.
Besiyeri, otoklavda sterilize edilmez. içinde çözündürülecek saf su işlemden önce otoklavda sterilize edilir.
Bu besiyeri kullanılmadan hemen önce hazırlanır.

aşkısı

salmonella hakkında bılgı